Вирусы
Перемещение птиц на международных рынках может вызвать смешение различных популяций с возможностью переноса широкого ряда микроорганизмов или антител к ним. Если группа птиц соприкасается с другой со скрытой инфекцией, то может произойти резкая вспышка заболевания. Такие латентно инфицированные птицы ставят владельцев перед дилеммой диагностирования и управления питомником. В то время как птицы – носители могут клинически не вызывать подозрений, вирус может распространяться постепенно через помет, мочу, дыхательные пути или отшелушивающиеся клетки эпителия перьев или кожи. В некоторых случаях латентно зараженные птицы могут уступить болезни, и вирус распространится очень быстро, и обе группы птиц заболеют. Искусственная инкубация и перемещение яиц предлагаются в качестве метода защиты данной популяции от появления вируса извне. Однако этот метод имеет существенный недостаток, потому что самка может передать антитела и некоторые вирусы потомству, когда яйцо развивается. Инфицированные новорожденные могут вызвать вспышку заболевания с высоким уровнем смертности в питомнике для молодняка.
В общем и целом, вирусные инфекции практически неизлечимы. Поддерживающие курсы, антибактериальные препараты для предотвращения появления вторичных бактериальных и грибковых инфекций, хорошее питание, включая наличие в рационе витамина C, остается единственным доступным терапевтическим методом для большинства вирусных инфекций. Появляющиеся концепции использования метода антисмысловых РНК технологий, несомненно, приведут к более конкретным методам лечения многих инфекционных болезней. Для лечения вирусных инфекций предлагается интерферон. Paramunity inducers оказались эффективными в лечении некоторых вирусных инфекций. Ацикловир оказался эффективным в лечении некоторых видов птичьего вируса герпеса и может иметь положительный эффект в лечении поксвирусных инфекций. Можно предотвратить серьезные вспышки вирусных заболеваний при наличии практического знания способов передачи и патогенеза конкретного вируса, при использовании определенных диагностических тестов для обнаружения инфекций с выраженными клиническими симптомами или субклинических инфекций, придерживаясь правил гигиены и принципа содержания закрытого питомника.
Принципы диагностирования
Четкий диагноз конкретной вирусной инфекции может быть сделан только при помощи определенных лабораторных диагностических методов. Клинические, патологические и гистологические изменения, возможно, наводят на размышления о диагнозе, но патогномоничные поражения редки, и поэтому необходимы всесторонние диагностические инструменты, чтобы подтвердить вирус как причину заболевания или смерти птицы. Существуют несколько процедур, которые можно использовать, чтобы подтвердить присутствие вирусной инфекции:
1) Выделение патогенного микроорганизма из тестового материала;
2) Выявление вирусных частиц или тел при помощи гистопатологии;
3) Выявление вирусного антигена (Ag) в пораженных тканях, при помощи антител (Ab);
4) Выявление вирусной нуклеиновой кислоты в пораженных тканях при помощи исследований нуклеиновой кислоты;
5) Косвенное выявление вирусной инфекции обнаружением гуморальных антител.
Вирусная болезнь может быть иногда выявлена обнаружением повышения титров антител в образцах сыворотки.
Исследования нуклеиновой кислоты точнее других методов и позволяют обнаружить небольшие концентрации вируса, а также способны обнаружить присутствие вирусной нуклеиновой кислоты до гистологических изменений.
Идентификация вирусов
Точная идентификация вируса при помощи электронного микроскопа возможна только при наличии относительно высокой концентрации вируса (как правило > 106 частиц/мл). Быстрым, но нечувствительным способом исследования под электронным микроскопом на присутствие вирусов является исследование свежих образцов ткани, закрепленных на сетках (подкрашенных осмием или другим подходящим красителем). Исследования нуклеиновой кислоты позволяют обнаруживать очень маленькие концентрации вируса в зараженных тканях или образцах (смывы зоба, помет, дыхательные выделения). Аналитические методы, такие как электрофорез без блот-систем, хроматография и исследования нуклеиновой кислоты являются самыми чувствительными методами выявления вируса. Они работают независимо от реакций Ag-Ab. Современные исследования в области генной инженерии будут, конечно, иметь большое влияние на выявление вирусов в будущем. В настоящее время при помощи исследования ДНК можно обнаружить полиомавирус и PBFD. Аналогичные диагностические тесты получат свое развитие. Все другие методы выявления вируса основаны на изменениях, вызванных вирусом, таким как гистологически заметные вирусные включения. Препараты, содержащие антитела к вирусу, могут использоваться для подтверждения присутствия вируса. В зависимости от цели теста могут использоваться поликлональные или моноклональные антитела. Моноклональные антитела обычно используют для идентификации определенные структур антигена и дифференциации серотипов, подтипов, вариантов и мутаций. Поликлональные антитела подходят для обычных диагностических тестов. Идентификация вирусов с использованием известных антител неизбежно требует, чтобы соответствующая система показала, что реакция антигена-антитела имела место. Тест выбирается с учетом цели теста (группоспецифические антигены, серологическое типирование) и имеющегося в наличии типа антитела (поливалентный, одновалентный, моноклональный).
Косвенная идентификация вируса
Методы косвенной идентификации вируса заключаются в выявлении определенных антител в сыворотке пациента. Чтобы дифференцировать Ab, которые были индуцированы в предшествующий раз, и Ab, вызванные текущей инфекцией, необходимо проверить два образца сыворотки, собранных в интервале две – три недели. Повышение или падение концентраций Ab или переключение от IgM к IgG показательны для активной инфекции. Яичный желток (содержащий IgG) может использоваться вместо сыворотки для некоторых диагностических тестов.
Серологические перекрестные реакции, вызванные близкородственными антигенами или антигенными детерминантами с идентичной структурой, могут дать ложный позитивный результат при использовании методов косвенной идентификации. Преципитирующие антитела (как при использовании в тесте иммунодиффузии) состоят прежде всего из IgM и появляются относительно быстро после инфекции и одинаково быстро распадаются, как только болезнетворный микроорганизм был устранен. Таким образом, тест иммунодиффузии полезен для выявления активно происходящей реакции антитела. Нужно отметить, что не все зараженные особи произведут преципитирующие антитела.
Материал для теста
Пригодность материала для выявления вирусных инфекций зависит от того, какие образцы – прижизненные или посмертные – доступны, и какая вирусная болезнь подозревается. Прижизненные образцы могут включать в себя помет, кожу, биопсию органа или пера, кровь или сыворотку, или мазки слизистой оболочки трахеи, клоаки, зева или конъюнктивы. Когда в питомнике проблемы, лучшим способом установить точный диагноз является сбор свежих посмертных образцов. Образцы надо быстро транспортировать, хорошо охлажденными, в среде, содержащей антибиотики. Соответствующие анамнестические данные будут очень полезны, чтобы помочь направить лабораторные диагностические усилия.
Тесты, направленные на идентификацию вируса
Иммунодиффузия (ID)
Иммунодиффузия – часто применяемый, недорогой метод выявления главным образом группоспецифических растворимых антигенов (прежде всего IgM). Антиген и антитело рассеиваются по направлению друг к другу в агаровом геле. Там, где реактивные партнеры встречаются, они формируют осадок, который виден в форме одной или нескольких бледных линий. Эта техника относительно проста и адекватно выполняет несколько задач. Тем не менее, она не очень чувствительна по сравнению с другими методами. Гель для тестирования сыворотки должен содержать 8%-ый NaCl.
Тест ингибирования гемагглютинации (HI)
Белки, присутствующие на поверхности некоторых вирусов, агглютинируют эритоциты некоторых птичьих или млекопитающих видов. Путем добавления антител, воздействующих на агглютинирующую части вируса, активность гемагглютинина нейтрализуется, и гемагглютинация не может происходить (ингибирование гемагглютинации - HI). HI тест распознает поверхностные антигены (прежде всего обнаруживает присутствие IgG).
Тест вирусной нейтрализации (VN)
Тестируемая сыворотка смешивается с антигеном. Если нейтрализующие антитела присутствуют в тестируемой сыворотке, и количественное соотношение верно, то вирус в данном образце будет нейтрализован. Установление того, что реакция Ag-Ab произошла, должно быть подтверждено демонстрацией того, что нейтрализованный вирус не способен к возбуждению болезни в тестируемой системе (обычно клеточной культуре). Хотя тесты VN могут выполняться для многих вирусов, они занимают много времени и требуют ряда разведений, для которых требуется большое количество материала и реактивов. Тест VN подходит для серологического типирования, в зависимости от вида вируса и типа используемого антитела.
Реакция связывания комплемента (CF)
Комплемент необходим, чтобы произошло связывание между Ag и Ab. Если реакция Ag-Ab происходит, тогда комплемент установлен (использован), и вторая реакция с системой индикатора Ag-Ab больше не может произойти. Эта система столь же сложна как тест ELISA, который намного более чувствителен. Более того, коммерчески доступный комплемент морской свинки не подходит для использования в тестах многих видов птиц. CF тест используется обычно для выявления группоспецифических антигенов.
ELISA
Антиген или антитело зафиксированы на планшете. Тестируемый материал добавляется (это может быть сыворотка для обнаружения Ab или образцы ткани для обнаружения Ag). Наличие реакции Ag-Ab выявляется путем добавления третьего Ag или Ab, меченного ферментом. Субстрат, катализируемый ферментной частью, в ходе реакции образует окрашенное вещество. Эта система очень чувствительна и технически проста в работе. Но необходима подготовка подходящего фермента, соответствующего специфике. Часто наблюдаются реакции, не связанные с целью исследования. Вообще, ELISA распознает группоспецифические антигены; однако, с использованием моноклональных антител, серотипы, биовары или мутации могут быть выявлены.
Иммунофлюоресценция (IF)
Антиген или Ab метят флуоресцирующим красителем. Если происходит реакция Ag-Ab с тестируемым материалом, флюоресценция присутствует после смывания реактивов. Достаточно часто происходит флюоресценция, не имеющая отношения к тесту, что усложняет интерпретацию теста. IF лучше всего подходит для выявления группоспецифических антигенов.
Радиоиммунологическое обследование (RIA)
Или антигены или антитела радиоактивно маркированы. Сама техника чрезвычайно похожа на IF. Хотя этот метод очень чувствителен, он несет принадлежащую ему опасность для персонала, имеющего дело с радиоактивными материалами, а также создает проблемы утилизации радиоактивных отходов. Возможна идентификация группоспецифических антигенов, сероваров или индивидуальных областей детерминанты при использовании соответствующих антител.
12345
Авторские статьи/Author's articles
Присоединяйтесь к ОК, чтобы подписаться на группу и комментировать публикации.
Нет комментариев