Бактериологическая диагностика

Бактериологическая диагностика включает микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды,
идентификацию выделенных культур по культуральным, биохимическим, тинкториальным и серологическим свойствам, а также постановку биологической пробы на лабораторных животных.
Учитывая возможность существования нетипичных вариантов листерий, бактериологическое подтверждение считается обязательным для определения наличия возбудителя и распространения листериозной инфекции.
Микроскопическое исследование.
Микроскопическому исследованию подвергают мазки-отпечатки из головного мозга, внутренних органов и тканей. При приготовлении мазковотпечатков чистым предметным стеклом 3-4 раза прикасаются к поверхности среза органа. Мазки готовят непосредственно из патологического материала, а также после подращивания его проб при 37°С в течение 4-6 часов. Мазки окрашивают по Граму, а также методами флюоресцирующих антител.
Возбудитель листериоза - Listeria monocytogenes - грамположительная подвижная неспорообразующая полиморфная, чаще палочковидная бактерия длиной 0,5-2,0 мкм. Располагается возбудитель одиночно или парами под углом в виде буквы V.
Бактериологическое исследование.
Из органов и обязательно головного мозга проводят обильные множественные посевы или предварительно готовят суспензию из головного мозга и паренхиматозных органов на физиологическом растворе в соотношении 1:5 и из нее делают посевы. Для культивирования листерий используют обычные среды с добавлением 1% глюкозы и 2-3% глицерина или печеночный агар и бульон (рН среды 7,2-7,4), а также кровяной агар и элективные среды.
В качестве дополнительного метода при отрицательном результате первичного посева рекомендуется часть исследуемого материала поместить в холодильник и хранить в течение 30 дней для проведения повторных
исследований через каждые 10 дней. При хранении в холодильнике при +4°С патологического материала, помещенного в глицерин, происходит размножение и накопление листерий. Рекомендуется хранение суспензии исследуемого материала в холодильнике в физиологическом растворе или мясопептонном бульоне (МПБ) с добавлением полимиксина 15-25 ЕД/мл для задержки роста контаминантов. При исследовании абортированных плодов посевы делают из содержимого желудка и внутренних органов. При исследовании истечений из половых органов, молока, а также из силоса (приложение 3) посевы проводят на печеночный агар в чашках и МПБ с 10% хлорида натрия, из которого потом делают пересевы на твердые среды. Посевы инкубируют в термостате при 370С с ежедневным просмотром в первые 3-4 дня. При отсутствии роста наблюдение за посевами проводят в течение двух недель.
Характерным для возбудителя листериоза является легкое помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре, наличие Р-гемолиза на кровяном агаре. Колонии листерий в проходящем свете имеют голубую
окраску с зеленоватым оттенком и мелкозернистую структуру. Из выделенной культуры делают мазки, окрашивая их по Г раму, а также
для люминесцентной микроскопии с применением прямого и непрямого метода флюоресцирующих антител.
При получении смешанной культуры ее очищают общепринятыми методами (отсев отдельных характерных колоний, дробный рассев на 2%-ный мясопептонный агар (МПА) в чашках), а также путем заражения молодых мышей.