Домовые мыши очень подвижные, юркие зверьки; они хорошо бегают (со скоростью до 12—13 км/ч), лазают, прыгают и неплохо плавают. Однако они редко удаляются далеко от своего гнезда. В природе у каждой мыши имеется индивидуальный участок: до 1200 м² у самцов и до 900 м² — у самок. Однако в условиях большой плотности популяции мыши селятся небольшими колониями или семейными группами, состоящими из одного доминантного самца и нескольких самок с потомством. Среди членов колонии устанавливается иерархические отношения. Взрослые самцы довольно агрессивны по отношению друг к другу, самки проявляют агрессию намного реже. Внутри семейных групп стычки редки, обычно они сводятся к изгнанию подросшего потомства. В отличие от серых крыс, домовые мыши скрытные и пугливые животные, едва заметив признаки опасности, они убегают в безопасное место. Вокализация типична для семейства мышиных, наиболее характерным издаваемым звуком является писк (к примеру, домовые мышата при прикосновении и болевой стимуляции издают короткие и тихие писки, слышимые человеком). Также домовые мыши способны издавать ультразвук, в частности, ультразвуковые сигналы издают самцы в период гона с целью привлечения самок. В целом репертуар издаваемых звуков разнообразен, биоакустики насчитали у домовых мышей десять различных звуковых и ультразвуковых сигналов. Домовые мыши могут издавать звуки продолжительностью от тысячных долей секунды до нескольких секунд. Однако, у домовых мышей акустические и визуальные сигналы играют второстепенную роль по сравнению с обонятельными.