Проточная цитометрия как направление в диагностике целиакии

Проточная цитометрия (проточная цитофлуориметрия, flow cytometry) – метод регистрации оптических параметров находящихся в потоке клеток или частиц по сигналам светорассеяния и флуоресценции в режиме поштучного анализа.
Это необычайно функциональный метод, который позволяет разносторонне анализировать различные популяции клеток, причём каждую клетку в отдельности.
📌 Физические принципы проточной цитометрии:
– Суспензия клеток, предварительно помеченных светящимися молекулами (флуорохромами), помещается в поток жидкости, пропускаемый через проточную ячейку. Выходит как бы «поток в потоке», что создаёт эффект гидродинамического фокусирования: исследуемые клетки выстраиваются в цепочку и в таком порядке пересекают пучок световых (обычно лазерных) лучей, служащих для анализа каждой отдельно взятой клетки.
– Свет, исходящий от флуорохромов, фокусируют оптической системой, состоящей из нескольких зеркал и линз, а затем раскладывают на определённые компоненты.
– Полученные световые сигналы преобразуют в электрические импульсы и анализируют при помощи специального программного обеспечения.
– Результатом цитометрического анализа становится определение состояния каждой клетки в каждой из популяций образца.
📌 В проточной цитометрии измеряются следующие параметры:
– Прямое светорассеяние (рассеяние света под малым углом, FSC) для определения относительного размера клеток или частиц
– Боковое светорассеяние (рассеяние света под прямым углом, SSC) для оценки неоднородности внутриклеточного содержимого клетки (например, размеры ядра и гранулярность цитоплазмы)
– Флюоресценция – для изучения клеточных маркеров с помощью меченных флюорохромными красителями антител к поверхностным и внутриклеточным компонентам клеток. При этом по интенсивности флюоресценции можно судить об экспрессии антигенов (количестве рецепторов) на клетках.
📌 Проточная цитометрия – относительно новое направление в диагностике целиакии. Обнадеживающие результаты были получены с использованием проточной цитометрии межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ), которая показывает увеличение количества МЭЛ при активной целиакии.
📌 Применение проточной цитометрии для определения интраэпителиальных лимфоцитов при активной целиакии
Обнаружение аномального фенотипа интраэпителиальных лимфоцитов является основой для деления рефрактерной целиакии на два типа, а также может иметь прогностическое значение:
– при 1-м типе рефрактерной целиакии инфильтрация лимфоцитами СОТК подобна нелеченой целиакии.
– при 2-м типе CD3-положительные интраэпителиальные T-клетки демонстрируют аномальный иммунофенотип лимфоцитов с потерей экспрессии маркеров дифференциации нормальной клеточной поверхности, таких как CD8.
CD3/CD8 и аберрантного Т-клеточного рецептора обнаруживаются благодаря иммуногистохимическому исследованию на фиксированных срезах или в свежезамороженных срезах ткани с помощью проточной цитометрии.
Аномальный фенотип характеризуется уменьшением нормальных поверхностных маркеров CD3, CD4, CD8 с появлением интрацитоплазматической экспрессии CD3 (CD3ε) в более чем 50% интраэпителиальных лимфоцитов (при иммуногистохимическом исследовании) с сохранением экспрессии TCR (γ или δ) в более чем 20–25% (с помощью проточной цитометрии).
#Диетика